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pH調控下豬血漿蛋白熱誘導納米顆粒的制備、表征及其穩定Pickering乳液性能(二)

來源: 食品工業科技 瀏覽 64 次 發布時間:2026-01-12

1.2實驗方法


1.2.1 PPP的純化


參考文獻的方法純化PPP。將噴霧干燥的PPP粉末溶解在超純水中配制成10.0%(w/v)的蛋白溶液,在4℃條件下10000 r/min離心15 min以除去不溶性雜質,用透析袋(截留分子量為7 kDa)對上清液進行透析。最后將透析液冷凍干燥即獲得PPP,密封后置于4℃保存備用。


1.2.2不同pH下PPP-NP的制備


取1.2.1制備獲得的PPP配制1%(w/v)的PPP溶液,室溫300 r/min攪拌2 h,冰箱中靜置過夜,充分水合,然后在4℃條件下10000 r/min、15 min離心取上清液,調節pH至4.0、6.5、7.0、7.5、8.0,在85℃水浴加熱20 min后,立即4℃冰水浴冷卻,獲得不同pH的PPP-NP的穩定懸浮液。同時設置對照樣品,不做任何處理。


1.2.3粒徑和Zeta-電位測定


粒徑和Zeta-電位由Nano ZS+MPT-2 Malvern納米粒度分析儀測定。參考文獻的方法,并稍作修改。用相應pH的超純水稀釋至0.4 mg/mL,在25℃下平衡120 s后測定。


1.2.4表面形貌觀察


將1.2.2制備的懸浮液使用液氮進行速凍后,再對其進行冷凍干燥獲得樣品粉末備用,將樣品粉末均勻分散于導電膠上,使用場發射掃描電子顯微鏡觀察樣品的表面形貌。


1.2.5圓二色光譜分析


參考文獻的方法,并在其基礎上修改。用相應pH的超純水將1.2.2制備的懸浮液稀釋至1 mg/mL。利用0.1 cm的石英比色皿,在190~240 nm的波長范圍內進行掃描,取三次掃描結果的平均值生成數據。


1.2.6界面張力測定


使用Tracker界面流變儀測量了不同pH的PPP-NP降低油水界面張力的能力。參考文獻的方法,稍作修改。將1.2.2制備的PPP-NP用相應pH的超純水稀釋10倍,然后添加到一個光學玻璃樣品皿中(40 mm×40 mm×30 mm),油相MCT添加到U型注射器(彎曲G18,內徑0.84 mm,長度10 cm)。在恒定的油滴體積下,監測了6000 s內界面張力值的變化,直到達到平衡。所有測量均在25℃下進行。


1.2.7不同pH下PPP-NP穩定的Pickering乳液的制備


將1.2.2制備的懸浮液與油相(MCT)按體積比9:1混合,先高速剪切3 min形成粗乳液,再75 MPa高壓均質制備Pickering乳液。


1.2.8乳液的粒徑測定


使用Mastersizer 2000激光粒度儀測定乳液液滴的大小和分布情況。測定乳液液滴的大小和分布情況。參考文獻的方法,測定前使乳液與分散劑(去離子水)充分混勻后進行測試,其中樣品折射率設置為1.47,分散劑折射率為1.33;泵速為2000 r/min。液滴的大小用體積加權平均粒徑(Volume-weighted diameter,d4,3)表示。其中計算公式如下:

式中:di表示油滴直徑,μm;ni表示直徑為di的油滴數量。


1.2.9乳液表觀粘度的測定


通過安東帕MCR92流變儀中帶有的不銹鋼板和板的幾何測量單元(pp-25,直徑25 mm)對乳液的表觀粘度進行測量。參考文獻的方法并加以修改。將制備的新鮮乳液放置在兩個平行板之間,間隙高度設置為1 mm。在0.1~1000 s?1的剪切速率范圍內進行剪切掃描,研究乳液表觀粘度的變化。


1.2.10乳液的儲藏穩定性


參考文獻的方法并加以修改。將新鮮制備的乳液(20 mL)轉移到30 mL玻璃瓶中,然后在45℃進行加速實驗,定期監測乳液的視覺外觀、粒徑和電位的變化,觀察其儲存穩定性。


1.2.11乳液的微觀結構


采用LEICA SP8共聚焦激光掃描顯微鏡觀察乳液的微觀結構。參考文獻的方法并稍加修改。將20μL的尼羅紅(2 mg/mL,溶于異丙醇)加入到1 mL乳液中,充分混勻完成染色。取染色后的乳液10μL涂在顯微鏡載玻片上,然后用蓋玻片覆蓋。在488 nm(Ar-Kr激光器)激發波長下,在25℃下采集物鏡放大倍數為63×,像素為1024×1024的乳液顯微圖像,并在45℃的加速儲藏條件下定期監測其乳液微觀結構的變化。


1.2.12多重光散射


利用多重光散射技術通過測定穩定性指數(Turbiscan stability index,TSI)和相對背散射光(Relative backscattered light,ΔBS)的變化來評估Pickering乳液的穩定性。實驗過程中,將新鮮制備的乳液(20 mL)轉移到其樣品瓶中,要求乳液不能有氣泡,儀器平衡后立即進行測定。設置掃描程序為45℃掃描48 h,每1 h進行一次掃描,通過儀器所帶軟件得到Pickering乳液的整體TSI值變化情況以及ΔBS隨時間的變化曲線。通過樣品的掃描圖譜變化情況,分析乳液的穩定性。


1.3數據處理


所有實驗至少重復3次,結果之間的差異用平均值±標準差(Standard deviation,SD)表示,使用Origin Pro 2017對結果進行統計分析,實驗數據采用SPSS 23進行統計學分析,應用Duncan檢驗分析樣品之間差異的顯著性,并且在P<0.05時定義顯著差異。


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